铅是一种神经发育毒物，它对神经细胞的正常发育以及神经递质的正常分泌产生影响和损害[1]，故而，进一步影响学习和记忆能力。海尔福口服液是我院研制生产的保健口服液，已初步证明了其有明显升高铅中毒小鼠Hb含量、降低ALT活性等作用[2]。为了进一步研究海尔福口服液对铅中毒所致小鼠记忆障碍的影响作用并分析其机制，我们曾用复杂迷宫趋食法测定小鼠记忆障碍的改善情况，结果较理想，为进一步验证其疗效，本文用Y型水迷宫测定小鼠的逃避潜伏期和平均逃避达标率。有报道铅中毒者血铅与血锌水平呈负相关，认为纠正缺锌状态是减少肠道对铅吸收的重要措施[3]，因此，我们尝试用锌**铅中毒小鼠，观察其改善记忆障碍的作用，并分析锌与海尔福口服液在**铅染毒所致小鼠记忆障碍中的作用关系。
1 资料与方法
1.1 实验动物 昆明种健康雄性小鼠60只，鼠龄35天，平均体重20g。由右江民族医学院动物室（合格）提供。
1.2试剂 醋酸铅为国产分析纯；海尔福口服液（由银花、茯苓、甘草等中药，经水提取、乙醇沉淀等流程制成）由本院海尔福研制中心提供；葡萄糖酸锌口服液由哈药集团三精制药有限公司生产（批号：05040331）。
1.3 Y型水迷宫测定方法 Y型水迷宫是测定小鼠辨别性记忆的*简单*常用的方法，该装置分长臂端和两分枝短臂端。长臂端长40cm , 宽15 cm，短臂端长30cm, 宽15 cm。长、短臂高均为20 cm。左侧短臂装有平台，供小鼠栖身，右侧短臂用木板盖上，作为暗道，水深10cm，水温（28±0.5）℃。。实验时将小鼠尾对叉路从长臂端轻轻放入水中，以其在10s内直接抵达平台为正确反应。小鼠抵达平台休息15s再重复训练，每天训练10次，连续5天，以每组平均正确反应率和抵达平台所需时间(逃避潜伏期)作为评价记忆的指标[4]，逃避潜伏期若超过10s则以10记录。
1.4 动物染毒和**方法 60小鼠随机分成5组：锌**组、锌加海尔福**组、海尔福**组、单纯染铅组、阴性对照组。除阴性对照组外，其余4组均用2g/L的醋酸铅水溶液，按每克体重0.007ml剂量作腹腔注射染毒，每天1次，连续35天；阴性对照组用等体积的生理盐水腹腔注射。染毒14天后，锌**组用葡萄糖酸锌水溶液灌胃，剂量按每只鼠0.02mg，每天1次；海尔福**组用海尔福口服液，剂量为每鼠0.1ml，用蒸馏水稀释1倍后灌胃，锌加海尔福**组用葡萄糖酸锌加海尔福口服液混合后灌胃，剂量与锌**组和海尔福**组相同；单纯染铅组和阴性对照组用等体积的蒸馏水灌胃，每天1次，直至实验结束。
1.5 统计学分析 用SPSS 10.0 统计软件包，进行方差分析。
2. 结果
2.1逃避潜伏期比较 单纯染铅组的逃避潜伏期长，与其他4组比较差异有显著性（p<0.01和p<0.05）。海尔福**组和锌**组的逃避潜伏期比锌加海尔福**组为短，差异有显著性（p<0.05）。从测试第1天到第5天，各组的逃避潜伏期以第1天*长，然后逐渐缩短，差异有显著性（p<0.01）。见表1。
表1 各组小鼠用Y型水迷宫所测的逃避潜伏期比较（X±S，S）
第1天 第2天 第3天 第4天 第天 合计 |
锌**组 4.82±0.72 3.92±0.51 3.25±0.48 3.15±0.80 2.78±0.80 3.66±0.98Δ* 锌加海尔福**组 5.30 ±1.32 4.28±1.38 3.86±1.08 3.56±1.31 3.24±0.62 4.10±1.32# 海尔福**组 5.，Δ* 合计 5.45 ±1.29 4.18±0.89▽ 3.43±1.00▽ 3.27±0.94▽3.28±1.02▽ |
注：与单纯染铅组比较，Δp<0.01，#p<0.05；与锌加海尔福**组比较，*p<0.05；与第1天比较，▽p<0.01。
2.2 平均逃避达标率比较 锌加海尔福**组和单纯染铅组的平均逃避达标率较其他3组低，锌**组与单纯染铅组比较，差异有显著性（p<0.05）。从第1天到第5天，各组平均逃避达标率总体上逐渐提高。见表2。
表 2 各组小鼠用Y型水迷宫所测的平均逃避达标率比较（X±s）
第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 合计 |
锌**组 83.85±0.07 90.63±0.06 95.01±0.05 98.10±0.04 97.15±0.04 94.20±0.06# 锌加海尔福**组 77.55±0.15 90.55±0.06 90.25±0.10 96.12±0.05 95.15±0.12 89.05±0.11 海尔福**组 73.23±0.19 88.35±0.08 96.15±0.05 100.00±0.00 97.38±0.05 91.27±0.13 单纯染铅组 77.35±0.15 88.25±0.13 90.44±0.06 92.23±0.08 96.36±0.05 88.15±0.11 阴性对照组 75.16±0.19 91.28±0.07 96.24±0.08 98.74±0.04 98.80±0.04 92.70±0.15 合计 79.46± 0.17 90.46±0.06 ▽ 93.33±0.08▽ 97.25±0.05▽ 96.36±0.06▽ |
注：与单纯染铅组比较，#p<0.05；与第1天比较，▽p<0.01。
3. 讨论
本实验用Y型水迷宫测定小鼠的记忆能力，锌**组和海尔福**组的逃避潜伏期比单纯染铅组短，平均逃避达标率提高，说明海尔福口服液和葡萄糖酸锌均对铅中毒所致小鼠的记忆障碍有一定改善作用，效果较好。锌具有很强的诱导金属硫蛋白（MT）作用，MT与铅结合可使铅失去毒性[5]；锌还能拮抗铅对ALAD的抑制作用。本实验结果与此报道一致。海尔福口服液是由银花、茯苓、甘草等中药提炼而成，其中的茯苓等有较强抗氧化作用。而铅致脑组织脂质过氧化是引起神经行为改变的生物学基础之一[6]，故较强的抗氧化成分可能是海尔福口服液**铅中毒所致小鼠的记忆障碍的原因之一，其机制有待进一步研究。
各组平均逃避达标率比较，差异不大，仅锌**组同单纯染铅组比较，差异有显著性。原因可能为实验时间较短，铅中毒小鼠的辨别性记忆损害尚不明显，表现为平均逃避达标率的虽有提高，但各组间差异不显著。
在实验结果中我们发现，锌加海尔福**组对铅中毒所致小鼠的记忆障碍有一定改善作用，但同锌**组和海尔福**组的**效果比较，逃避潜伏期延长，平均逃避达标率降低，提示海尔福口服液和葡萄糖酸锌在**铅中毒所致小鼠的记忆障碍上可能有一定拮抗作用，其机制不详，有待进一步研究。
